荧光判读抗中性粒细胞胞浆抗体()临床意义与判读简介

《2018年ANCA相关血管炎检测专家共识》指出: 建议临床疑似AAV患者,采用IIF-ANCA联合抗MPO抗体、抗PR3抗体检测。而对于初诊的临床疑似MPA、GPA患者,可使用高敏感性和高特异性的抗MPO抗体、抗PR3抗体检测方法进行检测。若检测结果为阴性,但临床仍高度怀疑小血管炎,应使用其他免疫学方法和/或IIF-ANCA进行重复检测。目前国内医疗机构ANCA相关血管炎的检测都是采用以上意见:间接免疫荧光法(pANCA/cANCA)联合其他方法学靶抗原(MPO/PR3)检测。

二、ANCA(间接免疫荧光法)核型判读

采用间接免疫荧光法检测ANCA时,抗核抗体阳性(尤其是高滴度均质/颗粒型)会影响ANCA核型的区分,故抗原底物(人中性粒细胞)通常采用甲醛、乙醇两种固定剂进行固定。乙醇固定的中性粒细胞可区分核周型pANCA和胞浆型cANCA,甲醛固定的中性粒细胞则可以排除ANA细胞核核型的干扰,通过观察不同固定剂固定的中性粒细胞可准确判读ANCA结果。现将不同核型判读方法分享如下:

1 pANCA(甲醛抵抗型)

pANCA(甲醛抵抗型)表现为甲醛固定的中性粒细胞呈胞浆颗粒状荧光,有时可见分叶核间增强荧光染色;乙醇固定的中性粒细胞呈现围绕核周平滑丝带状荧光,有时荧光向核内浸润,通常乙醇片亮度高于甲醛片。多数情况下pANCA(甲醛抵抗型)对应靶抗原为MPO,故也称为MPO型pANCA。

2 pANCA(甲醛敏感型)

pANCA(甲醛敏感型)表现为甲醛固定的中性粒细胞无荧光;乙醇固定的中性粒细胞呈现围绕核周平滑丝带状荧光,有时荧光向核内浸润,pANCA(甲醛敏感性)通常对应非MPO类的靶抗原,如乳铁蛋白(LF)、组织蛋白酶G(Cath G)、杀菌性/通透性增强蛋白(BPI)等,也称为非MPO型pANCA。

3 cANCA

cANCA表现为甲醛固定的中性粒细胞呈胞浆颗粒状荧光染色,有时可见分叶核间荧光增强染色;乙醇固定的中性粒细胞核型同甲醛一致,但有时甲醛片与乙醇片亮度会有差异,cANCA对应靶抗原为PR3和BPI。

4 不典型ANCA

不典型ANCA包括不典型pANCA和不典型cANCA,不典型ANCA表现为甲醛固定的中性粒细胞呈弱胞浆型或阴性,乙醇固定的中性粒细胞呈胞浆均匀分布的荧光,不典型ANCA既不符合pANCA标准,也不符合cANCA判读标准,在判读时应注意排除ANA的干扰以及经治疗后病人荧光减弱的情况。

5 aANCA

aANCA是pANCA和cANCA的混合核型,表现为甲醛固定的中性粒细胞可见胞浆颗粒状荧光,乙醇则可观察到胞浆颗粒和核周丝带状荧光同时出现,此类样本较罕见。

6 ANA阳性干扰

高滴度的抗核抗体核型(尤其是细胞核核型如均质型、核颗粒型)会对乙醇固定的中性粒细胞荧光结果产生干扰,表现为均匀或弥散的块状,甲醛固定的中性粒细胞为阴性,若甲醛片出现胞浆颗粒状荧光,则怀疑ANCA荧光为阳性,建议结合其他方法学靶抗原结果进行报告避免漏检。

三、ANCA相关血管炎临床特征

※ MPA:显微镜下多血管炎;GPA:肉芽肿性多血管炎;EGPA:嗜酸性肉芽肿性血管炎;MPO:髓过氧化物酶;PR3:蛋白酶3;

ANCA不仅在ANCA相关血管炎(AAV)中出现,也可存在于炎症性肠病、自身免疫性肝病等其他自身免疫病,以及恶性疾病、感染性疾病及药物诱导性血管炎等,我国AAV中MPO抗体阳性的MPA发病率最高,而PR3阳性的病人往往预后较差,若伴随GBM抗体的出现,更多可能发展为终末期肾病,如新月体型肾病,病程后期难以治愈,故对AAV病人的早期诊断尤为关键。

四、和杰创新产品

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THE END
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