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1、L o a d i ng Buf f er 蛋白印记精品文档5SDS-PAGE Loading Buffer 的配制（ 10 ml） （本方案摘自蛋白质技术手册汪家政、范明） 组分： Tris-HCl pH6.8 （60 mM ）； SDS （2%）；溴酚兰（ 0.1%）；甘油 （25%）；-巯基乙醇（ 14.4 mM）配制过程：1. 量取 1M Tris-HCl （pH6.8） 0.6 ml；50%的甘油 5 ml；10%的 SDS溶液 2 ml；1%的溴酚兰 1 ml；2. 加入去离子水定容至 10 ml；3. 分装；4. 在 4可保存数周， -20可保存数月之久。你还可以参考下面这个配方

2、：2SDS 凝胶加样缓冲液 组分（摘自分子克隆第三版）Tris-HCl pH6.8（100 mM）； SDS （4%）；溴酚兰（ 0.2%）；甘油 （20%）；-巯基乙醇或二硫苏糖醇（ 200 mM ） 不含硫代试剂的加样 Buffer 可在室温保存。-巯基乙醇或二硫苏糖醇临用前加 入。我想配点儿 5X 的 loading buffer, 分子克隆上写着 10%SDS ，我的配制思路是 （200ml ） 25ml1M Tris pH6.8, 20gSDS, 及 1g溴酚蓝配制到 100mL ，然后再 加 100ml 甘油，但是问题是 20gSDS 要溶解到那么小体积的水中实在是困 难，我把 S

4、的 buffer 摇“都摇不动 ”了2. 不知你为何要配那么多 loading buffer （况且是 5X 的），这些东西都是用量 很少的，建议你少配些，比如 10 ml？收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档3. 以下就以 2X loading buffer （配制 10 ml ）为例说明配制步骤首先配制 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） ，10%SDS 溶液。然后称取 0.02 g 溴酚蓝于小烧杯里，依次加入 1 mol/L Tris-HCl（pH6.8） 1ml，10%SDS 溶液 4ml ，甘油 2ml，去离子水 2ml，2-巯基乙醇 1ml。混匀， 分装成小份，

5、 -20 度保存。用时溶解，与样品 1:1 混合上样。需要说明的是， 2- 巯基乙醇是还原剂，也可用前加入，以防失效。5SDS-PAGE Loading Buffer TAKARA select组分浓度：? 250mM Tris-HCl （PH6.8） ;? 10% （W/V ） SDS；? 0.5% （W/V ） BPB；? 50% （V/V ）甘油；? 5% （V/V） 巯基乙醇（ 2-ME）配制量：? 5ml配制方法 ：1. 量取试剂（ 1M Tris-HCl （PH6.8） 1.25ml ；SDS 0.5g；BPB 25mg；甘 油 2.5ml ），置于 10ml 塑料离心管中。2.

6、加去离子水溶解后定容至 5ml 。3. 小份分装后室温保存。4. 使用前加入 2-ME（ 50ul/1ml ）5. 加入 2-ME 的 Loading Buffer 可在室温保存一个月左右。5XSDS 上样缓冲液0.5 mol/L Tris HCl （ pH6.8 ） 2.5ml 缓冲二硫叔糖醇（ DTT ， MW154.5 ） 0.39g 维持蛋白稳定SDS 0.5g 形成 SDS-PRO 复合物，使 pro 带负电溴酚蓝 0.025g 示踪指示剂收集于网络，如有侵权请联系管理员删除精品文档甘油 2.5ml 增加样品比重，利于加样（胶中甘油可减少 电渗我用的是 10ml:0.5mol/L T

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