联系我们时请说明是化工仪器网上看到的信息,谢谢!
产品 介绍 : Protein A 是一种分离自金黄色葡萄球菌的细胞壁蛋白, 主要通过 Fc 片段结合哺乳动物IgG,但是不与狗 lgG 结合,不结合人 lgM、lgD 和 IgA。蛋白 A 与蛋白 G 不同来源及亚类的免疫球蛋白结合能力丌一样,具体见表。天然 Protein A 有五个 IgG 结合区域和一些未知功能的区域,重组 protein A 去除了与白蛋白及细胞表面结合位点,只含有五个 IgG 结合区域,减少了非特异性吸附。
rProtein A Beads 产品性能 :
Protein A 和 Protein G 对不同抗体的结合能力 :
++++=结合能力强; ++=结合能力中等; —=结合能力弱或没有结合
纯化流程 :1 、Buffer 的准备
所用水和 Buffer 在使用之前建议用 0.22µm 或 0.45 µm 滤膜过滤。 结合/ 洗杂 Buffer: 0.15M NaCl, 20 mM Na 2 HPO 4 , pH 7.0洗脱 Buffer: 0.1M 甘氨酸, pH 3.0中和液: 1M Tris-HCl, pH8.5
2 、 样品准备 上柱之前要确保样品溶液有合适的离子强度和 pH 值, 可以用结合/洗杂缓冲液对血清样品、腹水或细胞培养液稀释,或者样品用结合/洗杂缓冲液透析。 样品在上样前建议离心或用 0.22µm 或 0.45µm 滤膜过滤,减少杂质,提高蛋白纯化效率和防止堵塞柱子。 3 、 样品纯化 1) 将 rProtein A Beads 装入合适的层析柱,层析用 5 倍柱体积的结合 Buffer 进行平衡,使填料处于与目的蛋白相同的缓冲体系下,起到保护蛋白的作用。 2) 将样品加到平衡好的 rProtein A Beads 中(保证目的蛋白与 rProtein A Beads 充分接触,提高目的蛋白的回收率) ,收集流出液。 3) 用 10-15 倍柱体积的洗杂 Buffer 进行清洗,去除非特异性吸附的杂蛋白,收集洗杂液。
4) 使用 5-10 倍柱体积的洗脱 Buffer,收集洗脱液,即目的蛋白组分。 5) 依次使用 3 倍柱体积的结合 Buffer 和 5 倍柱体积的去离子水平衡填料,后再用 5 倍柱 体积的 20%的乙醇平衡,然后保存在等体积的 20%的乙醇中,置于 4 度保存,防止填料被细菌污染。
4 、 SDS-PAGE 检测 将使用纯化产品得到的样品(包括流出组分、洗杂组分和洗脱组分)以及原始样品使用SDS-PAGE 检测纯化效果。
填料清洗 rProtein A Beads 可以重复使用而无需再生, 但随着一些变性物质的沉淀和蛋白的聚集,往往造成流速和结合载量都下降,严重影响柱子的性能,这时需要对树脂进行清洗。去除一些沉淀或变性物质用 2 倍柱体积的 6M 盐酸胍溶液进行清洗,然后立即用 5 倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。 去除一些疏水性吸附造成的非特异性吸附物质 用 3-4 倍柱体积的 70%乙醇或 2 倍柱体积的 1% Triton X-100 清洗,然后然后立即用 5倍柱体积的 PBS, pH 7.4 清洗。
问题及解决方案
亲和层析填料 rProtein A Beads琼脂糖凝胶亲和层析介质(纯化树脂)订购说明:
1、绝大部分产品备有现货,一般情况下都能订货当日发货。 2、部分非常用产品,需提前1-2日预订,海外期货则需要提前3-6周预订。 3、部分产品价格会因货期、批次等因素发生变化,若有变动以订货当日新价格为准。 4、每日订单截止时间为16点整,部分城市可到17点整,因超过截止时间造成当日不能发货的将于次日安排发货。5、请办理完货款后,将收据、底单等连同收货人的地址、姓名、等以传真、、短信、等形式通知我们。
运输说明:
1、极低温产品:极低温产品运输过程中加装干冰运输。用干冰把产品包裹起来,再用泡沫盒密封,胶带层层粘住泡沫盒,放入索莱宝的箱子,然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。2、低温产品:低温产品运输过程中加装索莱宝冰袋运输。事先用冰袋把产品包裹起来,再使用泡沫盒密封,用胶带严实密封泡沫盒,再放入索莱宝的箱子(保温效果少可以持续一周),然后交付给合作快递,安全快速高效放心的送客户的手中,保证产品的性质稳定如一,为您的实验保驾护航。3、常温产品:常温产品运输过程中无需加冰或者特殊包装。产品由公司库房人员快速配货,准确快速高效的快递保证产品快速送达您的手中。