认证主体：袁**（实名认证）
IP属地：福建
下载本文档
病理切片特殊处理规范病理切片的制作与处理是医学诊断过程中的关键环节，其质量直接影响病理诊断的准确性。特殊病理切片的处理要求更为严格，涉及多种组织类型、疾病状态及特殊染色技术。规范的特殊处理流程不仅能确保病理信息的完整性，还能为临床提供更可靠的诊断依据。本文将详细阐述各类特殊病理切片的处理规范，包括固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、染色及封片等步骤，并针对不同组织类型及染色方法提出具体要求。一、固定处理规范固定是病理切片制作的首要步骤，其目的是使组织细胞结构稳定，防止自溶及腐败。不同组织类型的固定要求有所差异。1.1活检组织固定活检组织通常体积较小，需快速固定以减少细胞变形。固定液常用10%中性缓冲甲醛溶液，固定时间根据组织大小而定，一般4-6小时。对于小叶结构精细的组织（如肺、肾），固定时间不宜过长，以免组织收缩变形。固定过程中需注意组织间的距离，避免重叠导致固定不均。1.2大体标本固定大体标本体积较大，固定时间需延长。固定液同样为10%中性缓冲甲醛溶液，但需确保标本完全浸没。固定时间一般需24-48小时，期间需定期翻动标本，保证固定均匀。对于脂肪含量高的组织（如乳腺），固定时间可适当延长，以充分渗透固定液。1.3特殊组织固定某些特殊组织（如神经组织、肌肉组织）对固定液有特殊要求。神经组织需使用含高浓度甲酰胺的固定液，以减少神经元轴突的肿胀；肌肉组织则需避免使用过高浓度的甲醛，以免肌纤维收缩。二、脱水与透明处理规范固定后的组织需经过脱水与透明处理，以去除水分并使组织透明，便于后续浸蜡。2.1脱水处理脱水通常使用梯度酒精系列，依次浸泡：70%酒精（1小时）、80%酒精（1小时）、90%酒精（1小时）、95%酒精（2小时）、无水乙醇（2次，每次2小时）。脱水过程中需确保酒精浓度逐级提升，避免组织因浓度骤变而收缩变形。对于含有较多脂质的组织（如脂肪组织），脱水时间需适当延长，以充分去除脂质。2.2透明处理脱水后的组织需进行透明处理，常用二甲苯或苯甲苯作为透明剂。透明时间一般需6-12小时，期间需更换透明剂2-3次，确保组织完全透明。透明后的组织需无色透明，否则浸蜡时易出现空泡。三、浸蜡与包埋处理规范透明后的组织需浸蜡包埋，以提供支撑并便于切片。3.1浸蜡处理浸蜡使用石蜡作为包埋剂，需分步进行：先在52℃-55℃的石蜡中浸泡1小时，再在58℃-60℃的石蜡中浸泡2小时，最后在62℃-65℃的石蜡中浸泡4小时。浸蜡过程中需缓慢升温，避免组织因温度骤变而变形。3.2包埋处理浸蜡后的组织需进行包埋，常用石蜡块作为包埋材料。包埋时需确保组织块紧密排列，避免空隙，否则切片时易出现断裂。对于体积较大的组织，可使用低熔点蜡（如蜂蜡）进行初步包埋，再转入石蜡中固化。四、切片处理规范包埋后的组织需切片，切片厚度直接影响病理诊断的准确性。4.1切片厚度常规病理切片厚度为4-5μm，但对于某些特殊研究（如免疫组化、电镜观察），需使用更薄的切片（如1-2μm）。切片厚度需使用切片机精确控制，避免厚薄不均。4.2切片方法切片方法分为手动切片与自动切片。手动切片适用于少量样本，需使用锋利的切片刀，并保持刀片锋利；自动切片适用于大批量样本，切片精度更高，但需定期校准切片机。4.3贴片处理切片后需将组织片贴附于载玻片上，常用明胶或蛋白胶作为贴片剂。贴片时需确保组织片平整，避免皱褶或重叠。贴片后的载玻片需在60℃-70℃干燥30分钟，以固定组织片。五、染色处理规范染色是病理诊断的核心环节，不同染色方法适用于不同的组织类型及疾病诊断。5.1常规染色常规染色包括HE染色（苏木精-伊红染色）和特殊染色。HE染色适用于大多数组织类型的常规诊断，染色步骤如下：1.脱水至95%酒精；2.入苏木精染液（60℃，30分钟）；3.蒸馏水洗涤；4.入1%盐酸酒精分化（1分钟）；5.蒸馏水洗涤；6.入伊红染液（1分钟）；7.95%酒精脱水；8.透明；9.中性树胶封片。5.2特殊染色特殊染色用于检测特定抗原或组织成分，常用方法包括：-免疫组化染色：用于检测肿瘤标志物（如HER2、Ki-67）；-特殊蛋白染色：如角蛋白染色（上皮组织）、肌红蛋白染色（肌肉组织）；-糖原染色：如阿尔辛蓝染色（检测糖原）；-血管染色：如血管内皮生长因子（VEGF）染色。特殊染色需使用相应抗体及显色剂，染色步骤需严格遵循说明书，避免抗体稀释或显色剂过载。六、封片处理规范封片后的切片需长期保存，常用封片剂包括中性树胶、甘油明胶及合成树脂封片剂。6.1中性树胶封片中性树胶透明度高，适用于常规病理诊断，但易被二甲苯溶解。封片步骤如下：1.组织片染色后透明；2.滴加中性树胶；3.添加防尘盖玻片；4.自然冷却后封片。6.2甘油明胶封片甘油明胶适用于长期保存，但透明度稍差。封片步骤如下：1.组织片染色后透明；2.滴加甘油明胶；3.添加防尘盖玻片；4.自然冷却后封片。6.3合成树脂封片剂合成树脂封片剂（如DPX）透明度高，抗紫外线能力强，适用于荧光染色及长期保存。封片步骤如下：1.组织片染色后透明；2.滴加合成树脂封片剂；3.添加防尘盖玻片；4.自然冷却后封片。七、特殊组织处理规范某些特殊组织类型需采用特殊处理方法，以确保病理诊断的准确性。7.1空气干燥组织如鼻咽黏膜、支气管上皮等，需采用空气干燥法固定，避免甲醛固定导致的细胞收缩。染色时需使用更短时间的苏木精染色，以减少细胞变形。7.2石蜡长期保存切片长期保存的石蜡切片需定期更换封片剂，避免封片剂老化导致组织染色模糊。建议每年更换一次封片剂，并使用防尘盖玻片减少灰尘污染。7.3肿瘤组织切片肿瘤组织切片需进行多张切片染色，包括HE染色、免疫组化染色及特殊染色，以全面评估肿瘤特征。切片厚度需控制在4-5μm，避免厚切片导致肿瘤结构模糊。八、质量控制规范病理切片的质量控制是确保诊断准确性的关键。8.1固定质量检查固定不足会导致组织自溶，固定过度则会导致细胞收缩变形。可通过观察组织细胞核形态及细胞轮廓判断固定是否适宜。8.2染色质量检查染色不均会导致诊断困难。可通过观察染色深度及细胞轮廓完整性判断染色质量。8.3封片质量检查封片剂老化或气泡会影响观察。需定期检查封片质量，确保组织透明且无气泡。九、常见问题及解决方法特殊病理切片处理过程中常见以下问题：9.1组织收缩变形原因：固定不充分或浸蜡不均。解决方法：延长固定时间，确保组织完全浸没于固定液中；分步浸蜡，避免温度骤变。9.2染色不均原因：染色时间控制不当或染色液污染。解决方法：严格遵循染色步骤，避免染色液反复使用；定期更换染色液。9.3封片剂老化原因：封片剂长时间暴露于空气中。解决方法：使用防尘盖玻片，定期更换封片剂。十、总结特殊
0/150
联系客服
本站为文档C2C交易模式，即用户上传的文档直接被用户下载，本站只是中间服务平台，本站所有文档下载所得的收益归上传人(含作者)所有。人人文库仅提供信息存储空间，仅对用户上传内容的表现方式做保护处理，对上载内容本身不做任何修改或编辑。若文档所含内容侵犯了您的版权或隐私，请立即通知人人文库网，我们立即给予删除！